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->关于PCR假阴性问题总结概括 |
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一、 摄谱仪因素
PCR实验对摄谱仪的倚赖性是颀长的，离心思、扩增仪都是导致PCR假阴性的因素。扩增仪的主要问题是孔间差，引动扩增败绩可扩增速率减低。而离心思的影响则更容易被不重视。国内运用离心思很少运用离心加速度（XXXg）作为参变量指标，而常运用转数作为参变量指标，这处就存在着一个问题，因为离心思的体积不一样，管用跳心半径也不一，因为这个一样的转速所萌生的离心思相差非常大(有的在数倍以上)，所以在相同的离心时间下，可能模型板并没有离心下来，导致PCR假阴性。这个问题在其它实验也有，但因基他实验都是标定大分子蛋白沉淀，对离心的速度要求较低所以不太表面化。提议运用小规模台式离心思的实验要注意一下子这个问题。
二、试药品质问题
PCR实验的成功与否试药的品质至关关紧，试药的品质问题牵涉到多个方面：细胞的裂解；模型板的抽提；引物位点的挑选；Taq酶的活性等等。那里面任一环节出了问题都会引动最后结果的假阴性。这些个都是试药品质的问题，因为这个选用高品质的PCR试药十分关紧。
三、核酸模型板问题
核酸模型板品质问题是抑制PCR最关紧的因素之一。核酸模型板在扩增区显露出来断开、蛋白粘贴、空间位阻等模型板品质问题都可能引动扩增败绩导致最后结果的假阴性或定量不正确。因为不管啥子提出取得办法都没可能获得绝对理想化的核酸模型板，因为这个核酸模型板品质固然与试药的品质相关，但它没可能由试药品质绝对解决。
核酸模型板问题除开模型板本身的问题外，还存在模型板溶液中制约Taq酶活性成分（如某些蛋白、离子等）效用，而造成扩增速率减低甚至于扩增败绩的问题。对此，有人鼓励大家施行模型板醇化，效果较为表面化。但另一个问题又显露出来了，那就是怎样保障醇化的回收率问题。总之，核酸模型板问题是必然性的问题，只能尽力尽量去减损。
四、操作担任职务的人素质能力问题
PCR实验的环节众多，并且对每一环节的品质要求都颀长，例如少加、漏加试药、离心不充分、循环参变量预设不正确、对于RNA抽提降解、局势恶化录败绩等等都能导致最后结果的假阴性。因为这个要求PCR的实验操作担任职务的人有美好的素质能力，能够恪守操作规程，并能敏感的发觉问题和解决问题。
五、其它
PCR实验中从样品的搜集、运送、保留着手就可以引动最后结果的假阴性，而对于病原体格检查验测定（如HBV）在人的身体血液系统显露出来有周期性变动也是值当注意的因素。
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